Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細胞

EPI300 Chemically Competent Cell

基因型：

F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara,leu)7697 galU galK λ–rpsL nupG trfA dhfr。

簡要說明：

EPI300細胞含有一個突變的trfA基因，該基因表達出的蛋白產(chǎn)物可以促進含有ori V復制子的質(zhì)粒的高拷貝擴繁，誘導劑Ⅰ可以誘導trfA基因的表達。當含有ori V復制子質(zhì)粒的EPI300細胞在LB/2YT或SOB培養(yǎng)基中生長時，trfA基因的表達被抑制，ori V復制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)維持在很低的水平；當在培養(yǎng)基中加入誘導劑Ⅰ，ori V復制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)可維持在很高的水平，提高了質(zhì)粒產(chǎn)量。因此EPI300菌株可以降低ori V復制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種不穩(wěn)定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（例如：哺乳動物基因組DNA）。

recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。lacZΔM15 標記的存在使EPI300可用于藍白斑篩選，rpsL賦予其lian霉素抗性。EPI300感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率可達3×108cfu/μg DNA

操作說明：

1.EPI300感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4.5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。 

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15 h。

注意事項：

1.感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。 

2.混入目的DNA時，應輕柔操作。