BY4742 酵母感受態細胞

簡要說明

BY4742菌株來源于釀酒酵母原始菌株——S288C，是實驗室的常用菌株，可直接通過PEG/LiAc將pYES2質粒轉化進入BY4742細胞內。質粒pYES2的篩選標志為URA，可用SD-URA板板進行篩選。BY4742感受態細胞經特殊工藝制作，pYES2質粒檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。

操作說明：

1、取一支無菌的1.5ml EP管，依次加入預冷的目的質粒1-3µg，Carrier DNA 10µl(95-100 度5min 快速冰浴，重復一次)，100µl冰上融化的AH109感受態細胞，PEG/LiAc500µl，輕輕翻轉混勻6-8次； 

2. 30℃水浴30min，每10min輕輕翻轉混勻6-8次；

3. 每支加入20µl的二甲基亞砜；（用于提高轉化效率，可不做）

4. 42℃水浴15min，每5min輕輕翻轉混勻6-8次；

5. 12000rpm瞬時離心棄上清，每支加入1ml的YPDPlus于30℃復蘇1h；（用于提高轉化效率，可不做）

6. 12000rpm瞬時離心棄上清，用100µl 0.9%NaCl重懸，涂板，30℃培養48-96h。

注意事項

1、感受態細胞最好在冰上融化。

2. 若使用pYES2質粒表達蛋白，需在培養基中加入2%的半乳糖（篩選培養基中不用加半乳糖；當需要目的蛋白表達時，需加入半乳糖代替葡萄糖作為碳源），以誘導目的基因的表達。

3. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

4. 同時轉化2-3種質粒時可增加質粒的用量。

5. 酵母為真核生物，不易長期保存，隨感受態在-80℃保存時間的延長，轉化效率會不斷下降，建議保存時間不超過90天。

6. BY4742酵母菌株對高溫敏感，最適生長溫度為27-30℃；高于31℃，生長速度和轉化效率呈指數下降。

7. 酵母在缺陷培養基中生長速度比YPDA培養基慢，培養基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板29℃，48 h培養可見直徑1 mm克隆；涂SD單缺平板29℃，48-60h培養可見直徑1 mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80h培養可見直徑1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培養可見直徑1 mm克隆。