Stable Chemically Competent Cell

基因型：

F'proA+B+ lacIq ?(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ?(ara-leu)7697 araD139 fhuA ?lacX74 galK16 galE15e14- Φ80dlacZ?M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rphspoT1 ?(mrr-hsdRMS -mcrBC)

簡要說明：

Stable菌株是 NEB公司開發的高轉化效率菌株，是逆轉錄病毒/慢病毒載體系統推薦使用的菌株，具有與Stbl2，Stbl3   wan全不同的基因型，但是表現出比Stbl2，Stbl3 更優異的性能，特別適合慢病毒或具有末端重復序列DNA 片段的克隆。基因組含有重組酶 recA1 rel A1 突變，可有效抑制長片段末端重復區的重組，降低錯誤重組的概率；同時含有核酸酶 endA1突變，避免了提取質粒過程中核酸酶的污染，大大提高了高純度病毒質粒的產量和質量。lacZΔM15 的存在使Stable可用于藍、白斑篩選，此菌株具有四環素和lian霉素抗性，Stable感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19檢測轉化效率>5×108 cfu/μg DNA。

操作說明：

1 Stable感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的 DNA（質粒或連接產物）并用手bo打 EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25 分鐘。

2. 42℃水浴熱激 45秒，迅速放回冰上并靜置 5分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入0.9 mL室溫 S.O.C.或LB培養基(S.O.C.營養豐富，可提高轉化效率)。

4.37℃，225 rpm復蘇 60 分鐘或30℃，225 rpm復蘇 90 分鐘。(當質粒中含有不穩定片段時，30℃培養可降低錯誤重組的概率，若轉化 control pUC19 計算轉化效率，則需 37℃，225 rpm復蘇 60 分鐘）

5. 5000rpm 離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C.或LB培養基上。 

6. 將平板倒置放于37℃或30℃培養箱過夜培養。 (當質粒中含有不穩定片段時，30℃培養可降低錯誤重組的概率，若轉化control pUC19計算轉化效率，則需 37℃培養過夜)

注意事項：

1. 對不穩定 DNA 片段的克隆或逆轉錄病毒/慢病毒載體的構建，涂板后平板應在 30℃培養，以減少發生錯誤重組的概率。 

2. 制備高純度病毒質粒時，應使用新鮮轉化的平板接菌，新鮮菌液提取質粒，菌液不可低溫保存后使用。 

3. 對不穩定的克隆或病毒質粒優先以質粒狀態保存，盡量避免將質粒保存在大腸桿菌細胞中。

4. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中 10分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。混入目的 DNA 時應輕柔操作。

5. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。