Chemically Competent Cell克隆感受態細胞

Turbo Chemically Competent Cell

基因型：

F'proA+B+ lacIqΔlacZM15 / fhuA2 Δ(lac-proAB) glnVgalK16 galE15 R(zgb-210::Tn10) TetS endA1thi-1 Δ(hsdSmcrB)5

簡要說明：

Turbo 菌株是生長最快的大腸桿菌菌株。平板上6.5 小時可見克隆，營養液中搖菌 4-6小時可提取質粒，缺失核酸內切酶 (endA)，提高了質粒DNA 的產量和質量；Turbo 菌株可嚴格控制 laclq的表達，可以克隆毒性基因；fhuA2 突變賦予Turbo 菌株對噬菌體 T1的抗性； lacZΔM15的存在使 Turbo可用于藍、白斑篩選。Turbo感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>5×108 cfu/μg DNA。

操作說明：

1. Turbo 感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質粒或連接產物） 并用手bo打 EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25 分鐘。

2. 42℃水浴熱激 45秒，迅速放回冰上并靜置 2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌SOC 或LB培養基，混勻后 37℃，200 rpm復蘇 60分鐘。 

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取 100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的 SOC 或 LB培養基上。 

5. 將平板倒置放于37℃培養 6.5 小時以上。

注意事項：

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8 分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入目的 DNA 時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。